全過濾無菌均質(zhì)袋
無菌均質(zhì)袋（帶整張濾膜）用水
培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質(zhì)的水，不使用離子交換器生產(chǎn)的去離子水。
稱量
稱量時要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗結(jié)果；干粉培養(yǎng)基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養(yǎng)基。
復(fù)水
復(fù)水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長；容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出；含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘；加熱培養(yǎng)基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養(yǎng)基使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養(yǎng)基營養(yǎng)物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。
滅菌
一般培養(yǎng)基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃ 15 min，含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國家標(biāo)準(zhǔn)或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。高溫可破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，還會使瓊脂的凝膠強度下降，因此必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復(fù)滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定，并定期采用生物指示菌法或化學(xué)變色紙片對滅菌效果進行驗證。
pH測定
微生物必須在適宜的pH范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性。培養(yǎng)基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH值，即培養(yǎng)基使用前的pH，并應(yīng)在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量，固體瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中，如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH，應(yīng)用1mol/L Na0H或 lmol/L HCL調(diào)整，注意不可反復(fù)調(diào)pH，否則會影響培養(yǎng)基的滲透壓。
配制好的培養(yǎng)基保存
滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量，應(yīng)該是在保存期限內(nèi)正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應(yīng)閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配制的當(dāng)天未使用完，應(yīng)于冷藏保存，如果保存時間超過2天，應(yīng)將其放入密封的塑料袋中保存。
